基因敲除是指将外源DNA元件导入到细胞染色体,定点修饰染色体上特定基因位点,使其基因组序列发生遗传改变,从而导致基因功能丧失的一种基因组编辑技术。通过技术改进对高等生物基因组进行高效、精确的定点改造是科学家们多年来的研究目标。近年,基因组编辑技术已进入飞速发展的时期,基于锌指核酸酶(ZFNs)和TALE核酸酶(TALENs)的基因组编辑技术运用越来越广。而在2012年以来迅速发展起来的基于CRISPR-Cas9系统的新技术,相对于传统敲除技术和TALENs/ZFNs技术而言,其操作更加简便,敲除效率更高。CRISPR/Cas9系统在包括水稻、玉米、小麦、烟草和拟南芥在内的多种植物中得到了成功应用。
我们提供的基于CRISPR/Cas9的基因定点敲除载体具有构建简单快速的优点,结合本公司拥有的成熟的玉米、水稻、烟草和拟南芥的植物遗传转化体系,可以为您提供从基因敲除靶点设计→载体构建→植物转化→基因敲除植株分子检测→结果分析的完整解决方案,加速您的科研工作进程!
l CRISPR/Cas9技术简介
在部分细菌中存在一种由高度保守的重复序列与完全不同的间区序列交替排列组成的特定基因组位点,称为成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)。在CRISPR侧翼区域存在CRISPR相关基因(CRISPR associated, Cas)。CRISPR和Cas构成了一种细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。
科研人员发现,来自产脓链球菌的核酸酶Cas9可以结合一种单导向RNA(sgRNA),并在sgRNA指引下切割含有一个前间区序列邻近基序(PAM)的DNA靶标位点。由于PAM序列结构简单,几乎在所有的基因中都能找到靶点,通过人工设计gRNA,CRISPR/Cas9系统目前已经成功应用于细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞和玉米、水稻、烟草和拟南芥等多种生物,是一种高效的基因组编辑工具。
基于CRISPR/Cas9技术的基因组定点敲除示意图
l 技术优势
1. 可实现对靶基因单个位点或多个位点同时敲除;
2. 也可同时对多个基因进行同时敲除;
3. 多个转化载体和转化系统可供选择;
4. 从设计到载体构建和植物转化,服务周期短,转化效率高。
l 服务流程及周期